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AFM游戏娱乐网站成为研究细胞损伤有力工具
栏目:行业资讯 发布时间:2020-06-11

苯甲酸钠又称安息香酸钠,是□□广泛应用于食品及碳酸饮料产业中的▓防腐剂。多年来世界上大多数国家一直允许用SB作为食品防腐剂,最大允许量在0.15~0.25wt%之间,在美国,SB的▓最大允许量为0.1wt%。随着食品工业的▓发展,食品中使用防腐剂的▓现象十分普遍。过去曾认为SB对人体无毒,但最近的▓研究表明,其可造成人体组织器官或机能的▓损害,具有遗传毒性,使染色体分裂出现异常,使染色体发生结构畸变以致断裂并且会产生肝硬化、肌肉损伤甚至致癌,Tsay等发现SB能使斑马幼虫发生畸变。长期饮用含有SB的▓碳酸饮料易使儿童产生多动症。因此,苯甲酸钠的▓生物安全性和对人体的▓危害程度必然要引起大家的▓重视。

将Balb/c系小鼠断髓处死,在超净台内无菌分离双侧腋窝、锁骨下、腹股沟浅表淋趋承和肠系抹垽淋趋承,PBS清洗,去除被膜,机械研磨,于200目不锈钢网筛过滤。收集细胞,用4oCPBS1200r/min离心5min。洗涤细胞2次,重悬于RPMI-1640培养液(含10%FBS及50μmol/Lβ-巯基乙醇),调整细胞密度为1×106/mL。台盼蓝染色观察细胞活力,活细胞数占98%。添加SB溶液至淋巴细胞培养液中,终浓度分别为0wt%、0.05wt%、0.1wt%和0.2wt%。将细胞在24孔板接种后放置于37oC、体积分数为5%的▓CO2培养箱中培养1h、6h、12h、18h。

样品制备分别取与不同浓度SB作用1h、6h、12h、18h后的▓淋巴细胞,滴于新剥离的▓云母片上,使其自然铺展,吸附10min,然后用2.5%的▓戊二醛(日本京都产)固定15min,用蒸馏水冲洗3次,室温自然干燥。

AFM成像将制备好的▓样品置于AFM(AutoprobeCPResearch,Thermomicroscopes企业,USA)的▓XY扫描台上,用监视器定位所要扫描的▓样品区域,在空气中室温下利用接触或非接触模式成像。AFM图像仅经过自带软件(IP2.1版)的▓平滑处理,以消除扫描方向上的▓低频背景噪音。

实验结果经AFM扫描成像,获得了正常淋巴细胞、与不同浓度SB作用不同时间后的▓淋巴细胞的▓拓扑形貌图(Topography)和误差信号图(Errorsignal),并分别对其表面超微结构进行了扫描分析,观察细胞数超过30个。检测结果发现,上述3种淋巴细胞均呈不同程度的▓形态结构改变。正常淋巴细胞呈较为规则的▓圆形,中间隆起,细胞表面总体较为平滑,高度在1.8~2.5μm之间,直径约为8~10μm。而与不同浓度SB作用后的▓淋巴细胞体积明显发生变化。高度减少,细胞表面形态结构更为复杂,中间部位出现明显破裂并且凹陷,呈“Y”型结构,边缘抹堒观察到有细微损伤分布,并且随着SB浓度的▓增加,细胞形态进一步发生改变,呈中间凹陷状,细胞边缘向四周扁平铺展。细胞表面球状颗粒进一步增多,表面粗糙度增大,细胞高度明显减少,直径增加(高度由2μm逐渐减少至1μm,直径由6μm逐渐增加至12μm)。对其局部小范围进行观察,AFM能清楚地观察到细胞膜密集的▓颗粒状突起物以及大量的▓孔洞,其中凹凸不平的▓细胞表面分布着大量小颗粒。选取不同细胞膜超微结构图的▓整个区域(5μm×5μm)进行测量,与SB作用后淋巴细胞的▓四个参数值均明显与正常淋巴细胞不同;对淋巴细胞膜形成的▓大小不一的▓颗粒进行统计,经SB作用后的▓淋巴细胞膜形成的▓颗粒逐渐增大。同时,随着与SB作用时间的▓延长,淋巴细胞出现的▓变化与上述情况类似,即作用时间越长,细胞损伤越严重,淋巴细胞的▓表面粗糙度也逐渐增加。

AFM是□□样品表面信息的▓收集工具,较易获得细胞的▓形貌、超微结构及其生化反应后细胞形态变化等信息,是□□研究细胞损伤的▓有力工具。淋巴细胞是□□机体免疫应答功能的▓重要细胞成分,其形态结构与其功能息息相关。因此利用AFM研究淋巴细胞与外界环境相互作用前后细胞形态结构及其细胞膜的▓变化,对了解淋巴细胞的▓生理功能具有十分重要的▓意义。

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